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CNE1、CNE2:苏州鉴达细胞株鉴定预警系列7
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本文参考:ExPASy Database、ICLAC Database、DSMZ Database

      CNE1、CNE2细胞株的建立,为我国鼻咽癌病因学研究、免疫学诊断及临床防治提供了良好的细胞实验模型。两者来源于不同个体:CNE1来源于一名女性高分化鳞癌患者;CNE2来源于一名男性低分化鳞癌患者。




(图片来源:ICLAC Database)

      但自2008年起,陆续有研究者发现这两株细胞株的STR分型结果呈现高度一致性,而且与HELA的STR数据具有较高相似度,此后又有多篇文献证实此发现。CNE1、CNE2被HELA污染,但并非完全来源于HELA,实为HELA与其他未知来源细胞的混合物。



                                                         来源

      CNE1细胞株由中国医学科学院、中山医学院协作建立。1975年8月,细胞株从一名58岁女性鼻咽癌患者的鼻咽部肿物的活检组织建立。病人术前诊断为鼻咽癌,病理诊断为高分化鳞癌。组织块培养10天后,少数组织周边开始出现上皮样细胞。在第12代后,上皮样细胞中开始出现梭形细胞。此后选择全为上皮样细胞传代,称CNE(即CNE1)细胞株;全为梭形细胞传代,则称CNF细胞株。CNE1未检出EB病毒的核抗原(EBNA)。

      CNE2细胞株由中国医学科学院、湛江医学院协作建立。1980年,细胞株从一名63岁男性鼻咽癌患者的活检组织建立。病理诊断为低分化鳞癌。接种一周后,上皮样细胞从组织块周边长出。接种两周后,开始出现纤维细胞,且生长占据优势,交替使用刮脱和胰酶的方法逐步去除纤维细胞。第四代开始细胞全部为上皮样细胞,且呈单层生长。第三代细胞EBNA检测呈阳性,但此后的传代细胞EBNA检测为阴性。

                                                    被HELA污染

      2008年,Sylvia Yat-Yee Chan等人的文章(PMID为18196576)报道,CNE1与CNE2的STR分型结果高度一致。更重要的发现是,两者的分型数据与HELA具有相似性,他们将两株细胞株及HELA的分型数据进行对比分析,发现在检测的15个位点中,CNE1、CNE2在每个位点的数据都至少包含一个HELA的等位基因,即有些位点(vWA、D8S1179、D7S820、CSF190、D19S433)并非与HELA基因型相同,仅含有HELA的一个等位基因。基于此发现,他们综合多种方法分析推测,CNE1、CNE2为HELA与其他未知来源细胞的混合物。




(图片来源:ExPASy Database)

      2014年,Michael J. Strong等人应用High-Throughput RNA Sequencing Analysis对包括CNE1、CNE2在内的多种鼻咽癌细胞株进行SNVs分析时发现,CNE1虽然被HELA污染,但并非完全来源于HELA。这也证实了Sylvia Yat-Yee Chan等人的发现。




(图片来源:Sylvia Yat-Yee Chan et al., 2008)

      2015年,Fang Ye等人同样对CNE1、CNE2进行STR分型,实验结果与Sylvia Yat-Yee Chan的结论一致。2017年,Yaqing Huang、Xiaocui Bian的文章(PMID分别为:28107433和28851942)也证实CNE1、CNE2被HELA污染。




(图片来源:Fang Ye et al., 2015)




(图片来源:Yaqing Huang et al., 2017)

                                         鉴达的CNE1、CNE2鉴定

      截止目前,鉴达受理CNE1、CNE2细胞株鉴定各有5株。与ExPASy、DSMZ数据库重新比对确认。

      CNE1实际鉴定结果:4株与文献报道一致,为HELA与未知来源细胞的混合物,1株为非人源细胞。

      CNE2实际鉴定结果:3株为HELA与未知来源细胞株的混合物品,1株为HELA,1株为无匹配结果。

      鉴达实际检测结果显示,与ExPASy、ICLAC数据库一致,提示CNE1、CNE2被HELA污染。

参考文献:

      1.中国医学科学院,人体鼻咽癌上皮样细胞株和梭形细胞株的建立,肿瘤防治研究,3:18~24,1978。

      2.中国医学科学院,从低分化鼻咽癌病人建立鼻咽癌上皮细胞株,癌症,2(2):70~72,1983。

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      4. Michael J Strong et al., Comprehensive High-Throughput RNA Sequencing Analysis Reveals Contamination of Multiple Nasopharyngeal Carcinoma Cell Lines With HeLa Cell Genomes. J Virol. 2014 Sep;88(18):10696-704.

      5. Fang Ye et al., Genetic profiling reveals an alarming rate of cross-contamination among human cell lines used in China. FASEB J. 2015 Oct;29(10):4268-72.

      6. Yaqing Huanget al., Investigation of Cross-Contamination and Misidentification of 278 Widely Used Tumor Cell Lines. PLoS One. 2017 Jan 20;12(1):e0170384.

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